瓶（桶）裝水中銅綠假單胞菌的污染主要原因有水源受到污染，或現(xiàn)有的較為簡單的水生產(chǎn)加工工藝；或生產(chǎn)過程中衛(wèi)生控制不嚴(yán)格，從業(yè)人員未經(jīng)消毒的手直接與礦泉水或容器內(nèi)壁接觸；或包裝材料未進(jìn)行徹底清洗消毒。

檢查食品（飲用水）中的銅綠假單胞菌成為食品抽檢必不可少的檢測(cè)項(xiàng)目，以檢測(cè)飲用水為例列舉銅綠假單胞菌的檢測(cè)方法（GB 8538-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法）：

1.水樣過濾

在100級(jí)的潔凈工作臺(tái)進(jìn)行過濾操作。首先用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器,將250mL水樣或稀釋液通過孔徑0.45μm的濾膜過濾,然后將過濾后的濾膜貼在已制備好的CN瓊脂平板上，平鋪并避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡。

2.培養(yǎng)

將平板倒置于36℃士1 C培養(yǎng)24 h~48 h,并防止干燥。

3.結(jié)果觀察

在培養(yǎng)20 h~24 h和40 h~48 h后觀察濾膜上菌落的生長情況并計(jì)數(shù)。

計(jì)數(shù)所有顯藍(lán)色或綠色(綠膿色素)疑似銅綠假單胞菌的菌落，并進(jìn)行綠膿菌素確證性試驗(yàn)。

在紫外線下檢查濾膜時(shí),應(yīng)避免長時(shí)間在紫外光下照射,否則可能會(huì)將平板上的菌落殺滅,而導(dǎo)致無法在證實(shí)培養(yǎng)基上生長。計(jì)數(shù)濾膜上所有發(fā)熒光不產(chǎn)綠膿色素疑似銅綠假單胞菌菌落,并進(jìn)行乙酰胺肉湯確證性試驗(yàn)。

將其他所有紅褐色不發(fā)熒光的菌落進(jìn)行氧化酶測(cè)試、乙酰胺液體培養(yǎng)基、金氏B培養(yǎng)基確證性試驗(yàn),培養(yǎng)20 h~24 h觀察結(jié)果,防止因?yàn)榕囵B(yǎng)40 h~48 h導(dǎo)致菌落過分生長而出現(xiàn)菌落融合。

在CN瓊脂上生長的菌落選擇和驗(yàn)證步驟見表31。

1、若CN板上是藍(lán)綠色（如下圖）疑似銅綠假單胞菌的菌落,需進(jìn)行綠膿菌素確證性試驗(yàn)

綠膿菌素試驗(yàn)：取可疑菌落2個(gè)~3個(gè),分別接種在綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基上,置36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h,加入三氯甲烷3mL~5mL,充分振蕩使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解于三氯甲烷液內(nèi),待三氯甲烷提取液呈藍(lán)色時(shí),用吸管將三氯甲烷移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL左右,振蕩后,靜置片刻。如上層鹽酸液內(nèi)出現(xiàn)粉紅色到紫紅色時(shí)為陽性,表示被檢物中有綠膿菌素存在。

1.1綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基中加入三氯甲烷后的顏色（如下圖）

1.2用吸管將三氯甲烷移到另一試管內(nèi)加入鹽酸，振蕩，靜置（如下圖）

1.3藍(lán)色菌落呈粉紅色，綠色菌落呈淡粉色，有綠膿菌素存在。

2、若CN板上有熒光（如下圖）

按照GB85538-2016標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)熒光（非藍(lán)綠）要進(jìn)行產(chǎn)氨實(shí)驗(yàn)。

2.1將產(chǎn)熒光的菌落的純培養(yǎng)物接種到乙酰胺肉湯中36℃培養(yǎng)24h，加入鈉氏試劑（如下圖）。

3、若CN板上是紅褐色

按照GB85538-2016標(biāo)準(zhǔn)，紅褐色菌落要進(jìn)行產(chǎn)氨試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)。金氏B產(chǎn)熒光試驗(yàn)。

鑒于本人經(jīng)驗(yàn)有限，接觸樣品不多，買的標(biāo)準(zhǔn)菌株也是綠色形態(tài)（前面那株藍(lán)色菌落也是樣品中發(fā)現(xiàn)的，甚是寶貴）。所以，至今未見過紅褐色菌落，若有同行有檢出或者見過，還望交流，多加學(xué)習(xí)。

3.1標(biāo)準(zhǔn)菌株形態(tài)（如下圖）

3.2產(chǎn)氨實(shí)驗(yàn)（同上，略）

3.3氧化酶試驗(yàn)（如下圖）

3.4金氏B產(chǎn)熒光試驗(yàn)（如下圖）

4、其他

其他非前面三種，則判斷不是銅綠假單胞菌。