中文字幕欧美一区二区_久久精品国产亚洲77777_91在线?清?看_狠狠干妹子_人妻夜夜爽爽88888视频_97综合网

食品伙伴網服務號
當前位置: 首頁 » 檢驗技術 » 培訓資料及講義 » 正文

DEAE-Sephadex A-50提取法純化多克隆抗體

放大字體  縮小字體 發布日期:2013-09-22  來源:實驗室資訊網
核心提示:DEAE-Sephadex A-50(簡稱A-50)為弱堿性陰離子交換劑,經過NaOH處理將Cl-型轉為OH-型后,可吸附酸性蛋白。1球蛋白屬中性蛋白,等
 DEAE-Sephadex A-50(簡稱A-50)為弱堿性陰離子交換劑,經過NaOH處理將Cl-型轉為OH-型后,可吸附酸性蛋白。γ1球蛋白屬中性蛋白,等電點為pH6.85~7.5,其余均屬酸性蛋白。在溶液為pH8.0時,酸性蛋白均被A-50 吸附。從而可分離純化IgG。
 
    1. 批量吸附法
    此法可在1天內完成提取過程,純化前后樣品體積變化不大,所得IgG無變性現象,抗體效價亦無明顯降低。制品可達PAGE及免疫電泳純。適用于提純人、羊、兔等血清中的IgG。
 
    【材料和試劑】
    (1)DEAE-Sephadex A-50。
    (2)PB緩沖液:0.01mol/L,pH6.5 Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液。
 
    【操作步驟】
    (1)A-50的預處理:稱取4~6g A-50懸浮于500~1000ml蒸餾水中,1h后傾去上層細粒。然后將A-50浸泡于0.5mol/L NaOH液(60~100ml)中,攪拌后靜置30min,以蒸餾水洗至中性,再用0.1mol/L NaH2PO4同上操作過程處理,蒸餾水洗至中性。最后用0.01mol/L,pH6.5 Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液(PB)平衡,減壓抽干,保存備用。
 
    (2)吸附提取:取15ml血清加等量0.01mol/L,pH6.5 PB稀釋至30ml(也可不稀釋),加入1/4體積濾干的DEAE-Sephadex A-50(相當于干重1g)混合。室溫(或4℃)浸泡1 h后過濾,收集濾液。再加入同樣體積的DEAE-Sephadex A-50重復上述處理過程共3次,亦可在血清內加入過量DEAE-Sephadex A-50吸附處理一次。收集濾液合并,即為提純的IgG制品。或再透析去鹽,濃縮、凍干保存備用。
 
      2.A-50柱層析法
     【材料和試劑】
     (1)DEAE-Sephadex A-50。
     (2)待純化標本:雜交瘤腹水或培養上清,免疫血清或飽和硫酸銨粗提品。
     (3)1.5×50cm 層析柱;透析袋及其他透析和層析所需的試劑和器材。
     (4)PB緩沖液:0.1mol/L,pH7.4 Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液。
 
     【操作步驟】
     (1)A-50經酸堿處理,平衡至中性后,浸泡于0.1mol/L,pH7.4 PB中,置4℃冰箱儲存備用。
     (2)裝柱:同DE52。
     (3)平衡:松開出水口螺旋夾,以PB平衡,控制流速為15滴/min,待洗脫液與流出液之pH值達到一致時,停止平衡。
     (4)加樣、洗脫、收集與濃縮:基本上同DE52,以0.1mol/L PB洗脫。
用過的DEAE-Sephadex A-50可用0.5mol/L Na2HPO4洗脫回收。洗至流出液中無蛋白(OD280nm<0.04)后再用蒸餾水洗至中性,加入0.02%疊氮鈉于4℃保存備用。
編輯:songjiajie2010

 
分享:
[ 網刊訂閱 ]  [ 檢驗技術搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦檢驗技術
點擊排行
檢驗技術
 
 
Processed in 0.171 second(s), 15 queries, Memory 0.9 M
主站蜘蛛池模板: 永久免费av无码国产网站 | 97精品视频在线观看自产线路二 | 日韩欧美中文免费 | 国产精品老牛影院av | 中文av一区 | 免费日韩片 | 国产超碰人人爽人人做AV | 亚洲色精品VR一区二区 | 狠狠干成人网 | 国产成网站18禁止久久影院 | 日韩一区二区三区高清免费看看 | 蜜臀av免费一区二区三区水牛 | 国产激情无码一区二区三区 | 大地资源二中文在线观看官网 | 精品视频免费播放 | 国产精品女同一区二区三区 | 日韩免费黄色片 | 日本丰满熟妇VIDEOS | 免费精品视频一区二区 | av中文字幕最新在线观看 | 欧美黄色免费影院 | 亚洲成人高清av | 久久精品99久久久久久2456 | 中文一区一区三区免费 | 成人黄网视频在线观看 | 欧美成人免费在线视频 | 熟女性饥渴一区二区三区 | 色97色成人 | 日本高清视频WWW夜色资源 | 男女一边摸一边做爽爽的免费软件 | 日本无遮挡色又黄的视频 | a在线免费看| 在线观看国产一区二区三区 | a级黄色片子 | 亚洲人成网站在线观看妞妞网 | xxxx交换夫妇com1 | 久久久国产三级 | 中文字幕一区二区三区乱码在线 | 四虎最新影院 | 在线高清理伦片a | 欧美日韩亚洲天堂 |