原 理

 

將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進行預染。再將預染過的血清置于瓊脂糖凝膠板上進行電泳分離。通電后，脂蛋白向正極移動，并分離為幾個區(qū)帶。

 

操 作

 

1．預染血清：血清0.2ml加蘇丹黑染色液0.2ml于小試管中，混合后置37℃水浴染色30分鐘，然后離心(2000轉/分，約5分鐘)。

 

2．制備瓊脂糖凝膠板：將已配制的0.45%瓊脂糖凝膠于沸水浴中加熱融化，用吸管吸取凝膠溶液澆注載玻片，每片2.5ml，靜置約半小時后凝固(天熱時需延長，可放冰箱數(shù)分鐘加速凝固)。

 

3．點加血清：已凝固的瓊脂糖凝膠板的一端約2cm處，用切口刀片垂直切入凝膠后立即取出，然后用銅絲小匙將長方小條凝膠取出。以小片濾紙吸干小槽中水分，用血色素吸管吸取經(jīng)過預染的血清約15μl，注入凝膠板上的小槽內。

 

4．電泳：將加過血清的凝膠板平行放入電泳槽中，樣品應在陰極一端。兩塊三層紗布于巴比妥緩沖液中浸潤，然后輕輕緊密貼在凝膠板兩端，紗布的另一端浸于電泳槽內的巴比妥緩沖液(注意：此電極緩沖液不能用三羥甲烷緩沖液代替)。接通電源，電壓為120~130V，每片電流為3~4mA。約經(jīng)電泳15至55分鐘，即可見分離之色帶。

 

結果及臨床意義

 

1．正常人血清脂蛋白可出現(xiàn)三條區(qū)帶，從負極到正極依次為β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最淺)、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些)，在原點處應無乳糜微粒。

 

2．如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深，結合血清甘油三酯明顯升高和膽固醇正常或略高，可以定為Ⅳ型高脂蛋白血癥。

 

3．如果β-脂蛋白區(qū)帶比正常血清明顯深染者，同時結合血清總膽固醇明顯增高、甘油三酯正常者為Ⅱa型；若結合血清總膽固醇增高而甘油三酯略高的前β略溶者為Ⅱb型。

 

4．結果β-和前β-兩區(qū)帶分離不開連在一起稱“寬β區(qū)帶”，結合血清甘油三酯和膽固醇均有所增高，可定為Ⅲ型。

 

5．如果原點出現(xiàn)乳糜微粒，β，前β均正常或減低，結合血清甘油三酯明顯升高，可定為Ⅰ型。

 

注意事項

 

1．電泳樣品要求為新鮮的空腹血清。

 

2．每一塊凝膠上可平行挖兩條小槽，因而可加兩個樣品。

 

3．如果用一形狀大小和小槽一樣的有機玻璃片，在瓊脂糖膠凝固前固定于適當位子上，當凝固后取出有機玻璃片，凝膠板上留下小槽可直接加樣，不需挖槽。

 

4．如果需要保留電泳樣本，可將電泳后之凝膠板(連同玻片)放于清水中浸泡脫鹽2小時，然后放烘箱(80℃左右)烘干即可。

 

試劑與器材

 

1．巴比緩沖液(pH8.6，離子強度0.075)：為電極緩沖液

 

巴比妥鈉15.4g，巴比妥2.76g，EDTA酸0.292g，加水溶解后加水至1000ml

 

2．三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.6)為凝膠緩沖液

 

三甲基氨基甲烷1.212g，EDTA酸0.29g，NaCl 15.85g加水溶解后加水至1000ml

 

3．瓊脂糖凝膠

 

瓊脂糖0.45g，三痙甲基氨基甲烷緩沖液50ml，水50ml

 

加熱至沸，待瓊脂糖溶解后立即停止加熱。

 

4．挖槽工具制作

 

切口刀：刀口長15mm的刀片，中央夾一有機玻璃或木片，用螺絲固定，使兩刀片相距1.5mm。挖槽小匙：用直徑1.5mm的銅絲約6cm長，一端錘成扁平，用砂紙磨光。

5．電泳槽和電泳儀：同血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的儀器。