增菌
　　以無菌手續(xù)稱取檢驗(yàn)25g，加在225mL營養(yǎng)肉湯中，以均質(zhì)器打碎1min或用乳缽加滅菌砂磨碎。取出適量，接種乳糖膽鹽培養(yǎng)基，以測定大腸菌群MPN，其余的移入500mL廣口瓶內(nèi)，于36±1℃培養(yǎng)6h。挑取1環(huán)，接種于1管30mL腸道菌增菌肉湯內(nèi)，于42℃培養(yǎng)18h。

分離
　　將乳糖發(fā)酵陽性的乳糖膽鹽發(fā)酵管和增菌液分別劃線接種麥康凱或伊紅美藍(lán)瓊脂平板；污染嚴(yán)重的檢樣，可將檢樣勻液直接劃線接種麥康凱或伊紅美藍(lán)平板，于36±1℃培養(yǎng)18～24h，觀察菌落。不但要注意乳糖發(fā)酵的菌落，同時也要注意乳糖不發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的菌落。

　　附：麥康凱瓊脂平板照片

　　　　EMB平板原理及照片

生化試驗(yàn):
　自鑒別平板上直接挑取數(shù)個菌落分別接種三糖鐵瓊脂(TSI)或克氏雙糖鐵瓊脂(KI)。同時將這些培養(yǎng)物分別接種蛋白胨水、半固體、pH7.2尿素瓊脂、KCN肉湯和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基。以上培養(yǎng)物均在36℃培養(yǎng)過夜。
　TSI斜面產(chǎn)酸或不產(chǎn)酸，底層產(chǎn)酸，H2S陰性，KCN陰性和尿素陰性的培養(yǎng)物為大腸埃希氏菌。TSI底層不產(chǎn)酸，或H2S、KCN、尿素有任一項(xiàng)為陽性的培養(yǎng)物，均非大腸埃希氏菌。必要時做氧化酶試驗(yàn)和革蘭氏染色。
　　

　　附：三糖鐵瓊脂(TSI)原理及照片

　　　　克氏雙糖鐵瓊脂照片

　　　　尿素酶試驗(yàn)原理及照片

　　　　血清學(xué)試驗(yàn)
　　假定試驗(yàn)：挑取經(jīng)生化試驗(yàn)證實(shí)為大腸埃希氏菌的瓊脂培養(yǎng)物，用致病性大腸埃希氏菌、侵襲性大腸埃希氏菌和產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌多價(jià)O血清和出血性大腸埃希氏菌O157血清做玻片凝集試驗(yàn)。

　　當(dāng)與某一種多價(jià)O血清凝集時，再與該多價(jià)血清所包含的單價(jià)O血清做試驗(yàn)。如與某一個單價(jià)O血清呈現(xiàn)強(qiáng)凝集反應(yīng)，即為假定試驗(yàn)陽性。

　　證實(shí)試驗(yàn)：制備O抗原懸液，稀釋至與Mac Farland3號比濁管相當(dāng)?shù)臐舛取Ｔ�效價(jià)為1：160～1：320的O血清，用0.5%鹽水稀釋至1：40。稀釋血清與抗原懸液在10mm×75mm試管內(nèi)等量混合，做單管凝集試驗(yàn)。混勻后放于50℃水浴箱內(nèi)，經(jīng)16h后觀察結(jié)果。如出現(xiàn)凝集，可證實(shí)為該O抗原。
　　附：致瀉性大腸桿菌及O血清。

腸毒素試驗(yàn)（產(chǎn)毒素性大腸桿菌）（LT－不耐熱腸毒素，ST－耐熱腸毒素）
　　1　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測LT和ST。
　　2　雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測LT
　　3　乳鼠罐胃試驗(yàn)檢測ST

　　　附：腸毒素試驗(yàn)
　　
結(jié)果報(bào)告
　　綜合以上生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、腸毒素試驗(yàn)作出報(bào)告。