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大豆中皂苷的分離與測定技術?

已解決 懸賞分:0 提問時間 2009-02-06 14:12 - 解決時間 2009-02-06 14:57
大豆中皂苷的分離與測定
3571 次關注     提問者: spzst  
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http://www.hg17.com/knowledgeview902.html

本方法適用于大豆及其制品中大豆總皂苷的測定(在測定前樣品需前處理)。
1. 方法提要
分光光度法測定大豆總皂苷含量的新方法,以齊墩果酸作為標準品,采用分光光度法,配合薄層分析結果測定了經大孔樹脂吸附法、正丁醇再分配法和混合法精制純化后的三種大豆總皂苷樣品含量。
2. 儀器
(1)721分光光度儀:上海第三分析儀器廠。
(2)電熱恒溫水浴鍋:北京長源實驗設備廠。
3. 試劑
(1)齊墩果酸標準品(含量為99.999%):中國藥品生物制品檢定所。
(2)人參皂苷標準品(含量為99.999%):中國藥品生物制品檢定所。
(3)大豆皂苷Ⅰ標準品:日本靜崗縣立大學富田薰教授惠贈。
(4)CMC及硅膠G(薄層層析用):青島海洋化工集團生產。
(5)顯色劑:氯仿+甲醇+水(65+35+10)混勻靜置取上層。
(6)氯仿及甲醇(分析純):上海化工廠生產。
(7)98%濃硫酸:哈爾濱化工廠生產,稀釋成10%溶液待用。
(8)高氯酸。
(9)冰醋酸。
(10)5%香草醛-冰醋酸溶液。
(11)齊墩果酸標準溶液:準確稱取齊墩果酸標準品27.60mg,加甲醇溶解,定容至100mL,得濃度為0.276μg/μL的標準溶液。(標明小數點后2位由分析天平精度決定)。
4. 測定步驟
(1)樣品處理:
樣品1:為豆粕乙醇提取物經大孔樹脂吸附法純化的大豆總皂苷制得物,棕
黃色粉末。
樣品2:為豆粕乙醇提取物經正丁醇再分配法純化制得的大豆總皂苷提取
物,黃色粉末。
樣品3:為將樣品2按樣品1的方法時一步純化處理的大豆總皂苷制得物,
為淺黃色片狀結晶。
準確稱取樣品1、樣品2及樣品3,分別為31.2、26.6、27.2mg,以甲醇溶解后分別定容于100mL容量瓶中,即得濃度分別為0.312、0.266、272μg/μL的樣品溶液。
(2)標準曲線的繪制:準確吸取齊墩果酸標準溶液100、200、300、400、500、600μL于具塞試管中,70℃水浴上蒸干,于每個試管中加新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL,置60℃水浴上加熱15min,流水冷卻,加冰醋酸5mL,搖勻,以分光光度計560nm波長處測量吸光度值A,繪制標準曲線圖并將結果做統計分析得到回歸方程。
(3)樣品中大豆總皂苷含量的測定:
a. 樣品的薄層色譜分析:把提取的樣品溶液,人參皂苷的90%醇提取物的甲醇溶液及劑墩果酸標準液點于CMC-硅膠G(0.3%)薄層板上,進行分析。展開劑CH3Cl3+CH3OH+H2O(65+35+10),顯色劑:10%的硫酸溶液,110℃加熱10min。
b. 大豆皂苷與劑墩果酸量比換算系數的推算:
樣品的測定:吸取300μL樣品1,樣品2和樣品3溶液,按4.(2)項下進行操作,測得A值,每個樣品各取3份測定。
(4)精密度試驗:連續測定劑墩果酸標準品溶液200μL,方法同上,共5次,得出相對標準差(RSD)。
(5)回收率試驗:準確吸取樣品1溶液200μL于3只具塞試管上,加入準確吸取的齊墩果酸標準溶液100μL,按4.(2)項下操作,測得在560nm波長處的吸光度A值;同時做樣品1的300μL、400μL各3份,同上操作;計算回收率及相對標準偏差RSD。
5. 結果計算
  回答者: 首席大弟子   2009-02-06 14:57   


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