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果汁中總糖的測(cè)定方法
糖果—還原糖的測(cè)定
1 直接滴定法
2 原理
樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，在加熱條件下，直接滴定標(biāo)定過的堿性酒石酸銅液，以次甲基藍(lán)作指示劑，根據(jù)樣品液消耗體積，計(jì)算還原糖量。
3 試劑
3.1 堿性酒石酸銅甲液
稱取15g硫酸銅（CuSO4•5H2O）及0.05g次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至1000mL。
3.2 堿性酒石酸銅乙液
稱取50g酒石酸鉀鈉及75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000mL，貯存于橡膠塞玻璃瓶內(nèi)。
3.3 乙酸鋅溶液
稱取21.9g乙酸鋅，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀釋至100mL。
3.4 亞鐵氰化鉀溶液（10.6+89.4）
稱取10.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解并稀釋至100mL。
3.5 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/mL）
精密稱取1.000g經(jīng)過98～100℃干燥至恒量的純葡萄糖，加水溶解后加入5mL鹽酸，并以水稀釋至1000mL。此溶液每毫升相當(dāng)于1mg葡萄糖。
3.6 鹽酸
4 儀器
4.1 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器和設(shè)備
4.2 古氏坩堝或G4垂融坩堝
5 操作步驟
5.1 樣品處理
將樣品搗碎混勻待用，樣品應(yīng)避免暴露在空氣和陽光下，并盡可能迅速地進(jìn)行分析。
稱取約2.5～5g樣品，置于250mL容量瓶中，加50 mL水，搖勻后慢慢加入乙酸鋅溶液5mL及亞鐵氰化鉀溶液（10.6+89.4）5mL，加水至刻度，混勻。靜置30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。
5.2 標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液
吸取5.0mL堿性酒石酸銅甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每兩秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，同時(shí)平行操作三份，取其平均值，計(jì)算每10mL（甲、乙液各5mL）堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量（mg）。
5.3 樣品溶液預(yù)測(cè)
吸取5.0mL堿性酒石酸銅甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以每兩秒1滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。
5.4 樣品溶液測(cè)定 1
吸取5.0mL堿性酒石酸銅甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加比預(yù)測(cè)體積少1mL的樣品溶液，使在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸繼續(xù)以每兩秒1滴的速度滴定，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積，同法平行操作三份，得出平均消耗體積。
6 結(jié)果計(jì)算
按下式計(jì)算糖果中還原糖的含量： 100100025021×××=VmmX
式中：X—樣品中還原糖的含量（以葡萄糖計(jì)），%；
m1—10mL堿性酒石酸銅溶液（甲、乙液各5mL）相當(dāng)于還原糖（以葡萄糖計(jì)）的質(zhì)量，mg；
m2—樣品質(zhì)量，g；
V—測(cè)定時(shí)平均消耗樣品溶液體積，mL。
7 精密度
同一樣品兩次平行測(cè)定值相對(duì)差不得超過15%。
水果、蔬菜可溶性糖測(cè)定法
1 適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)適用于新鮮水果、蔬菜、干果可溶性糖的測(cè)定。
2 測(cè)定原理
在沸熱條件下,用還原糖溶液滴定一定量的費(fèi)林試劑時(shí)將費(fèi)林試劑中的二價(jià)銅還原為
一價(jià)銅,以亞甲基藍(lán)為指示劑,稍過量的還原糖立即使藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無色
的還原型亞甲基藍(lán)。
3 儀器設(shè)備
a. 高速組織搗碎機(jī)；
b. 電熱恒溫水浴；
c. 1000W調(diào)溫電爐；
d. 玻璃儀器：200ml,250ml容量瓶；250ml錐形瓶；50ml堿式滴定管。
4 試劑配制
4.1 費(fèi)林試劑甲：稱取硫酸銅(CuSO4·5H2O,分析純)34.6g溶于水中,稀釋至500ml,
過濾,貯于棕色瓶內(nèi)。
4.2 費(fèi)林試劑乙：稱取氫氧化鈉 50g和酒石酸鉀鈉(KNaC4O6H4·4H2O,分析純)138g溶
于水中,稀釋至 500ml,用石棉墊漏斗抽濾。
4.3 轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取9.5g蔗糖(分析純)用水溶解后轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中,加入
6MHCl(分析純)10ml,加水至100ml。在20～25℃下放置三天或在 25℃保溫24h,然后用水
定容(此為酸化的1%轉(zhuǎn)化糖液,可保存3～4個(gè)月)。測(cè)定時(shí),取1%轉(zhuǎn)化糖液 25.00ml放入
250ml容量瓶中,加入甲基紅指示劑一滴,用 1MNaOH溶液中和后用水定容,即為1mg/ml轉(zhuǎn)
化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。
4.4 亞甲基藍(lán)溶液：稱取0.5g亞甲基藍(lán)(分析純)溶于100ml水中。
4.5 乙酸鋅溶液：稱取21.9g乙酸鋅［Zn(OAC)2·2H2O,分析純］溶于水中,加冰乙
酸3ml,稀釋至 100ml。
4.6 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀［K4Fe(CN)6·3H2O,分析純］溶于水,
稀釋至 100ml。
5 樣品提取液制備
取待測(cè)樣品適量,洗凈,用不銹鋼刀將可食部分切成適當(dāng)小塊充分混勻后,按四分法
取樣。稱取 100g鮮樣加入等重量的水,放入組織搗碎機(jī)中搗成1:1勻漿,有些材料勻漿比
例可適當(dāng)調(diào)整,多汁果蔬類可直接搗漿。稱取勻漿25.0或50.0g(相當(dāng)于樣品12.5或25.0g)
放入150ml燒杯中,含有機(jī)酸較多的材料加0.5～2.0g粉狀CaCO3調(diào)至中性(廣范試紙檢試)。
用水將樣液全部轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中,并調(diào)整體積約為200ml。置80±2℃水浴保溫30min,
其間搖動(dòng)數(shù)次,取出加入乙酸鋅溶液及亞鐵氰化鉀溶液各 2～5ml,冷卻至室溫后,用
水定容,過濾備用。
6 還原糖測(cè)定
6.1 費(fèi)林試劑的標(biāo)定
取費(fèi)林試劑甲、乙各5.00ml或在測(cè)定前先等體積混合后取10.00ml混合液于 250ml
錐形瓶中,放入玻璃珠4～5粒,先加入比預(yù)測(cè)(按 6.2進(jìn)行預(yù)測(cè))僅少 0.5ml的 1mg/ml轉(zhuǎn)
化糖標(biāo)準(zhǔn)液。將此混合液置 1000W電爐上加熱,使其在2min左右沸騰,準(zhǔn)確煮沸2min,此
時(shí)不離開電爐,立即加入 0.5%亞甲基藍(lán)指示劑 6滴,并繼續(xù)以每 4～5s的滴速滴加標(biāo)準(zhǔn)
糖液,直至二價(jià)銅離子完全被還原生成磚紅色氧化亞銅沉淀,溶液藍(lán)色褪盡為終點(diǎn)。用
準(zhǔn)確滴定標(biāo)準(zhǔn)糖液的毫升數(shù)V1,乘以標(biāo)準(zhǔn)糖液濃度 ［mg/ml］,即得 10ml費(fèi)林試劑所相
當(dāng)?shù)奶堑暮量藬?shù)。
注：無色的還原型亞甲基藍(lán)極易被空氣中的氧所氧化,應(yīng)調(diào)節(jié)電爐溫度使瓶內(nèi)溶液始
終保持沸騰狀態(tài),液面覆蓋水蒸氣不與空氣接觸。整個(gè)滴定過程錐形瓶不能離開
電爐隨意搖動(dòng)。
6.2 預(yù)測(cè)
取費(fèi)林試劑甲、乙各5.00ml或 10.00ml混合液于250ml錐形瓶中,由滴定管加入待測(cè)
糖液約 15ml,在電爐上加熱至沸,約沸 15s后迅速滴加待測(cè)糖液,至呈現(xiàn)極輕微的藍(lán)色為
止,此時(shí)加入 0.5%亞甲基藍(lán)指示劑 6 滴,繼續(xù)滴加待測(cè)糖液,直至溶液藍(lán)色褪盡為止,記
下待測(cè)糖液的用量 V2(毫升數(shù))。
6.3 準(zhǔn)確測(cè)定
取費(fèi)林試劑甲、乙各5.00ml或10.00ml混合液加入錐形瓶中,由滴定管加入比預(yù)測(cè)僅
少0.5ml的待測(cè)糖液,并補(bǔ)加V1－V2 毫升水(標(biāo)定費(fèi)林試劑所消耗的標(biāo)準(zhǔn)糖液毫升數(shù)V1減
去預(yù)測(cè)消耗的待測(cè)糖液毫升數(shù) V2,即為應(yīng)補(bǔ)加水的毫升數(shù)),使其與標(biāo)定費(fèi)林試劑時(shí)的反
應(yīng)體積一致。以下按費(fèi)林試劑標(biāo)定同樣操作,繼續(xù)滴至終點(diǎn)。前后沸熱時(shí)間須在 3min左
右。待測(cè)糖液消耗量應(yīng)控制在15～50ml范圍內(nèi),不能大于標(biāo)定費(fèi)林試劑所用標(biāo)準(zhǔn)糖液體積
V1。否則應(yīng)增減稱樣量重新制備待測(cè)液。
7 可溶性總糖測(cè)定
取已經(jīng)制備的待測(cè)液100ml于200ml容量瓶中,加 6MHCl10ml。在80±2℃水浴加熱
10min,放入冷水槽中冷卻后,加甲基紅指示劑二滴用6M及 1MNaOH溶液中和,用水定容。
以下步驟同 6.2、6.3。
8 結(jié)果計(jì)算
8.1 計(jì)算式
a. 還原糖(%)按式(1)計(jì)算：
G 250
還原糖(%,以轉(zhuǎn)化糖計(jì))＝──×────×100………………… (1)
V W×1000
b. 可溶性總糖(%)按式(2)計(jì)算：
G A 250
可溶性總糖(%,以轉(zhuǎn)化糖計(jì))＝──-×──×──-×100…………(2)
V W 1000
式中： W—─樣品稱重,g；
G—─10ml費(fèi)林試劑相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化糖, mg；
V—─準(zhǔn)確滴定時(shí)所用待測(cè)液的體積,ml；
A—─稀釋倍數(shù)；
250—─定容體積,ml；
1000—─由毫克換算為克。
c. 非還原糖(%)按式(3)計(jì)算：
非還原糖(%,以蔗糖計(jì))＝(可溶性總糖－還原糖)×0.95……………(3)
式中： 0.95—由轉(zhuǎn)化糖換算成蔗糖的因數(shù)。
8.2 結(jié)果表示
測(cè)定結(jié)果計(jì)算到小數(shù)點(diǎn)后二位,兩次平行試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)相差；含量在5%以下的不得
超過3%；含量在 5%～10%的不得超過 2%；含量在10%以上的不得超過 1%。鮮樣以鮮
基表示,風(fēng)干樣以風(fēng)干基表示。
注：還原糖及可溶性總糖也可用葡萄糖表示,費(fèi)林試劑需另用葡萄糖標(biāo)定,非還原糖
用轉(zhuǎn)化糖換算成蔗糖形式表示。
附 錄 A
提取劑的選擇
(補(bǔ)充件)
A.1 本標(biāo)準(zhǔn)法是用水作提取劑。在測(cè)定可溶性總糖時(shí),蔗糖需進(jìn)行水解。但一些含菊
糖和可溶性淀粉較多的果蔬樣品,當(dāng)用水作提取劑時(shí),這部分物質(zhì)也會(huì)被提取出來,對(duì)該
類樣品要用80%乙醇作提取劑將多糖分離除去。具體操作步驟如下。
A.2 取成熟度適中,有代表性的水果、蔬菜適量,洗凈,用不銹鋼刀將可食部分切成適
當(dāng)小塊,充分混勻后按四分法取樣。稱取100g鮮樣加入等重量的95%乙醇放入組織搗碎
機(jī)中搗成1:1勻漿,稱取勻漿25.0或50.0g(相當(dāng)于樣品12.5g或25.0g)放入150ml燒杯中。
含有機(jī)酸較多的樣品加0.5～2.0g粉狀CaCO3調(diào)至中性。繼續(xù)加入95%乙醇使其最后濃度
約達(dá)80%,用80%乙醇將樣液全部轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中,并調(diào)整體積約為200ml。置80±2℃
水浴保溫 30min,其間搖動(dòng)數(shù)次,取出冷卻至室溫后,用80%乙醇定容。取一定量(100～
250ml)乙醇浸出液放入蒸發(fā)皿中,在 65～75℃水浴上蒸去乙醇,加少量水使沉淀物軟化
分散,加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液各 2～5ml,然后轉(zhuǎn)入250ml容量瓶,用水洗滌蒸
發(fā)皿一并洗入容量瓶中,定容,過濾待測(cè)。