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細胞周期的DNA檢測

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

Ⅰ、樣品準備 準備以下一種或幾種樣品

A、組織單細胞懸浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盤細胞)

B、組織培養(yǎng)細胞

C、Ficoll-hypaque分離的單核細胞

Ⅱ、反應體系-DNA低滲緩沖液

檸檬酸三鈉     0.25g

Triton-X 100 0.75ml

Propidium iodide 0.025g

核糖核酸酶      0.005g

蒸餾水        250ml

我們將該DNA低滲溶液于密閉瓶子中存放數(shù)月后并無發(fā)現(xiàn)有任何染色活性的丟失

Ⅲ、染色

1、 每一個管子中放入1×106個細胞;

2、 樣品離心后盡可能完全地移去上清液,并且不要打碎沉淀塊;

3、 入1ml的DNA低滲染色緩沖液至沉淀中,并混勻;

4、 樣品于4℃下避光30分鐘或最長不超過1個小時以備流式細胞儀分析。

注意:延長在低滲緩沖液的曝光時間會引起樣品碎片的增加。

 
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