SPA提取的方法很多，包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。現(xiàn)將常用的方法介紹如下：

1．煮沸提取法

⑴ 將菌株接種于蛋白胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)20h~24h。

⑵ 以0.15mol/L pH5.9PB液將菌苔洗下，配成10%(V/V)的懸液。

⑶ 水浴中煮沸1h，迅速冷卻至4℃，4 000r/min離心20min，去沉淀。

⑷ 以1mol/LHCl將上清液調(diào)pH至3.0~3.5，然后4 000r/min離心30min。

⑸ 沉淀以pH5.9PB溶解，然后12 000r/min離心20min。

⑹ 上清液加4.7倍量的95%酒精，充分混合后，.4 000r/min離心20min。

⑺ 沉淀(可直接凍干為粗提SPA制品)加PH7.4PBS液溶解，12 000r/min離心20min。

⑻ 上清液即為粗提SPA液。

⑼ Sephadex G100過(guò)柱，上樣后用0.05mol/L pH7.4 PBS液洗脫，流速控制在每管2ml~3ml/20min，收集流出液。

⑽ 測(cè)OD275nm值及用對(duì)流免疫電泳檢測(cè)每管的活性，將有活性的各管合并、濃縮或凍干。

2．溶菌酶消化法

⑴ 將培養(yǎng)的SPA菌以pH 8.0 0.02mol/L Tris－HCl緩沖液配成10%~15%的懸液。

⑵ 按20:1(W/W)的量加入SPA菌液與溶菌酶(活力為1萬(wàn)U/mg蛋白)37℃水溶攪拌24h。

⑶ 置4℃冷卻后，以12 000g離心30min。

⑷ 取上清，調(diào)pH值至7.0。

⑸ 加硫酸銨，邊加邊攪拌，使溶液呈80%的飽和度，4℃過(guò)夜。

⑹ 12 000g離心30min。

⑺ 以少量蒸餾水將沉淀溶解。

⑻ 透析或過(guò)Sephadex G50除鹽，即為粗制的SPA制品。