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瓊脂糖凝膠電泳檢測調亡細胞

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08
1.用不同方法誘導細胞調亡后,取106調亡細胞,置1.5ml離心管中,用PBS洗滌一次。在微量離心機上全速離心5秒鐘,去上清液。加入100μl含5mol/L異硫氰酸胍,100mmol/L 2-巰基乙醇的25mmol/L枸櫞酸鈉緩沖液pH7.0,在旋渦混懸器上混懸20秒鐘,破壞細胞,變性蛋白質。
2.加入50μl含7.5mol/L醋酸氨和0.8mg/ml糖原的水溶液,混勻;加入300μl 100%乙醇,4℃保存過夜。
3.在微量離心機上全速離心30分鐘,去上清液。加入75%乙醇同樣離心洗滌沉淀物2次。用20μl含100μg/ml無DNA酶的RNA酶的TE緩沖液消化RNA,37℃ 30分鐘。加入10μl甘油和少量溴酚藍,直接點樣。
4.用50ml TAE溶解2g瓊脂糖,加入0.25μg/ml溴乙啶。倒板后加樣,用100bp DNA標記物作為標記。25mV電泳過夜。在紫外線下觀察結果。調亡細胞的DNA呈相差200bp的條帶的梯形圖。
 
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