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愈傷組織和試管苗的培養(yǎng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

愈傷組織的培養(yǎng) 一般來說,從接種外植體到出現(xiàn)愈傷組織,需要經過2周時間。2周之內就可以看到外植體上逐漸長出乳白色或黃白色的瘤狀愈傷組織。首次培養(yǎng)愈傷組織時,恒溫箱的門應該關閉,不必見光,因為在無光條件下愈傷組織長得更快。2周以后,由于培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分已接近耗盡,必須更換培養(yǎng)基,進行繼代培養(yǎng)。

愈傷組織的繼代培養(yǎng) 進行繼代培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基,和培養(yǎng)愈傷組織所用的培養(yǎng)基相同。在嚴格的無菌條件下(接種箱內)將愈傷組織連同原來的外植體,一起移到新的培養(yǎng)基上。愈傷組織的繼代培養(yǎng),一代為20 d。如果延長培養(yǎng)時間,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質會減少,外植體也會分泌一些有毒物質,造成自身中毒。20 d以后,可以根據愈傷組織的大小,決定是繼續(xù)進行繼代培養(yǎng),還是進行試管苗培養(yǎng)。如果愈傷組織長到直徑為1~1?5 cm時,就可以進行試管苗培養(yǎng),否則還需要進行第二次繼代培養(yǎng)。

在愈傷組織進行繼代培養(yǎng)期間,可以將恒溫箱的門打開,讓愈傷組織見光。愈傷組織見光后,顏色可以轉為綠色。

試管苗的培養(yǎng) 當愈傷組織長到一定大小后,可以更換培養(yǎng)基,進行試管苗的培養(yǎng)。試管苗的培養(yǎng)分為生芽培養(yǎng)和生根培養(yǎng)。要想培育出一株完整的試管幼苗,必須先進行生芽培養(yǎng),然后進行生根培養(yǎng)。如果順序顛倒,先誘導生根,就不好誘導生芽了。生芽大約需要4~6周的時間,而生根培養(yǎng)時,1周以后就可以見到幼根了。注意,試管苗應該進行見光培養(yǎng)。

下面列出繼代培養(yǎng)和試管苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方。①繼代培養(yǎng)和生芽培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方是:MS培養(yǎng)基 6BA(質量濃度為0.5~1.0 mg/L) NAA(質量濃度為0.1~0.15 mg/L)。即在1 L MS培養(yǎng)基中加入5~10 mL6BA和1~1.5 mL的NAA母液。NAA配合6BA,可以促進不定芽的生長。②生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方是:MS培養(yǎng)基 NAA(質量濃度為0.1~0.5 mg/L)。即在1 L MS培養(yǎng)基中加入1~5 mL的NAA母液。NAA起促進生根的作用。

 

 
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