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重組質(zhì)粒的提取

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-28
質(zhì)粒提取過程參照E.Z.N.A Plasmid Extraction Kit進(jìn)行。
(1) 用無菌牙簽挑取平板上白色單菌落(5~10個(gè))分別接種至3-5ml LB培養(yǎng)液(Amp )中,200rpm培養(yǎng)14~16小時(shí);
(2) 室溫下,10,000g離心1分鐘收菌;
(3) 加入溶液I 250μl,渦旋重懸菌體;
(4) 加入溶液II 250μl,溫和倒轉(zhuǎn)4~6次混勻,室溫放置2分鐘
(5) 加入350μl溶液III,溫和倒轉(zhuǎn)至有白色絮狀沉淀產(chǎn)生, 室溫下,10,000g離心10分鐘;
(6) 轉(zhuǎn)移上清液于分離柱中,室溫下,10,000g離心1分鐘;
(7) 倒棄流出液,加入500μl HB Buffer,室溫下,10,000g離心1分鐘
(8) 倒棄流出液,加入750μl Wash Buffer,室溫下,10,000g離心1分鐘,倒棄流出液,重復(fù)此步驟一次;
(9) 室溫下,10,000g離心1分鐘,以去除分離柱中殘余的乙醇
(10) 將分離柱重新放入一個(gè)干凈的1.5ml離心管中,加入30~50μl滅菌水,靜置3-5分鐘,定溫下,10,000g離心1分鐘以洗出質(zhì)粒DNA,-20℃保存。
 

 

 
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