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液相夾心雜交

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06
    1 親合雜交:在靶核酸存在下,兩個探針與靶雜交,形成夾心結(jié)構(gòu),雜交完成后,雜交物可移到新的管或凹孔中,在其中雜交物上的吸附探針可結(jié)合到固相支持物上,而雜交物上的檢測探針可產(chǎn)生檢測信號。用生物素標記吸附探針,用125I標記檢測探針,這個系統(tǒng)的敏感性可檢測出4×106靶分子。該試驗保持了固相夾心雜交的高度特異性。
  2 采用多組合成探針和化學(xué)發(fā)光檢測:第一類探針是未標記的檢測探針和液相吸附探針,它們有50個堿基長,其中含有30個細菌特異序列堿基和20個堿基的單鏈長尾;第二類探針是固相吸附探針,它可吸附在小珠或微孔板上。未標記檢測探針的單鏈長尾用于結(jié)合擴增多個標記探針,液相吸附探針和靶雜交物從溶液中分離并固定在小珠或微板上,典型的試驗可用25個不同的檢測探針和10個不同的吸附探針。第一個標記檢測探針上附著很多酶(堿性磷酸酶或過氧化物酶)可實現(xiàn)未標記檢測探針的擴增。使用化學(xué)發(fā)光酶的底物比用顯色反應(yīng)酶的底物更敏感。這個雜交方法已用于乙肝病毒、沙眼衣原體、淋球菌以及質(zhì)粒抗性的檢測,敏感性達到能檢測5×104雙鏈DNA分子。
 

 

 
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