1．取材：取外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。
2．EDTA處理：先置入0.02％EDTA中室溫置5分鐘。
3．冷消化：換入0.25％胰蛋白酶中，置4℃過(guò)夜。
4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開。
5．溫消化：取出表皮單獨(dú)處理，用剪刀剪成更小的塊后，置入新的0.25％胰蛋白酶中，37℃再消化30～60分鐘。
6．用吸管輕輕反復(fù)吹打，使成細(xì)胞懸液。
7．培養(yǎng)液：通過(guò)80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過(guò)后，低速離心，吸上清，直接加入Eagle液和20％小牛血清，制成細(xì)胞懸液，接種入碟皿中，CO2溫箱培養(yǎng)。