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免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):IgA的分離與提純

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-27

(一)材料與試劑配制

1.DEAE52纖維素

2.0.10Mol/L ZnSO4液

ZnSO4·7H2O 2.88g

加水至1 000.00ml

3.飽和硫酸銨溶液

4.10%EDTA—Na

5.SephadexG200

6.0.01Mol/L pH7.4PB液

7.0.10Mol/L pH6.4PB液

8.血清

(二)操作方法

1.取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液,調pH至7.0,室溫攪拌1h,離心去沉淀。

2.于上清液中加入等量的飽和硫酸銨溶液,混勻后靜置30min或冰箱過夜。

3.10 000r/min離心10min,去上清。

4.取沉淀溶于4ml10%EDTA-Na溶液中。

5.生理鹽水中透析除鹽。

6.過DE52柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脫蛋白(IgG)棄去。

7.換用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脫,收集蛋白峰,即為IgA。

8.再過SephadexG200柱,洗液為0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl),收集洗脫液測OD280值,取第一峰即為純化IgA。

9.透析、濃縮、鑒定。

 

 
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