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免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):連續提取免疫球蛋

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-27

(一)試劑及配制

1.飽和硫酸銨液

2.各種磷酸鹽緩沖液

⑴ 0.2mol/L原液

A液:0.20Mol/L NaH2PO4液

NaH2PO4·H2O 31.20g

H2O 1 000ml

B液:0.20Mol/L Na2HPO4液

Na2HPO4·12H2O 71.7g

H2O 1 000ml

⑵ 0.10Mol/L pH8.0PB液
A液: 53ml

B液: 947ml

H2O 加至 2 000ml

⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB液

取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml,加H2O至2 000ml

⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB液

取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml,加水至2 000ml。

⑸ 0.035 Mol/L pH8.0 PB液

取0.10.1 Mol/L pH8.0 PB液700ml,加水至2 000ml。

⑹ 0.10Mol/L pH5.8PB液

A: 920ml

B: 80ml

H2O 加至 2 000ml

⑺ 0.40Mol/L pH5.2pB液

a液.0.40Mol/L NaH2PO4液

NaH2PO4·2H2O 62.40g

H2O 加至 1 000ml

B液.0.40Mol/L Na2HPO4液

Na2HPO4·12H2O 143.4g

H2O 加至 1 000ml

取a液 960ml

b液 40ml

混合即可。

⑻ 0.01 Mol/L pH8.0PBS液

取0.10Mol/L pH8.0 PB液 100ml

NaCl 8.20g

H2O 加至 1 000ml

3.DEAE-纖維素(細粒級)

4.SephadexG200

(二)操作方法

1.取一定量的血清,加等量的生理鹽水,然后逐漸滴加飽和硫酸銨溶液,使成40%的飽和度,靜置30min。

2.10 000r/min離心10min,去上清。

3.加入一定量的生理鹽水,使沉淀溶解,再加入飽和硫酸銨溶液,使成40%飽和度。10 000r/min離心10min,去上清。

4.再重復步驟3一次。

5.將沉淀以少量生理鹽水溶解,透析,除鹽濃縮。

6.制備DEAE-纖維素柱,以0.005Mol/L pH8.0PB液平衡。

同時制備SephadexG200凝膠柱,以0.01Mol/L pH8.0PBS液平衡并進行洗脫。

7.以0.005Mol/L pH8.0PB液洗脫,得蛋白液為IgG。

7. 以0.025 Mol/L pH8.0PB液洗脫,得蛋白主要是IgE,再過SephadexG200凝膠柱,收集第一峰即為純IgE。

8. 以0.035 Mol/L pH8.0PB液洗脫,得蛋白主要是IgA,再過SephadexG200凝膠柱,收集第一峰即為純IgA。

10.以0.10Mol/L pH5.8PB液洗脫,洗脫液主要有IgM、IgG及白蛋白的混雜物。

11.以0.40Mol/L pH5.2PB液洗脫,得蛋白液主要是IgM。過SephadexG200,收集第二峰即為純IgM。

 
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